HPLC

1) Injecteur

introduit l'échantillon dans un circuit sous pression (SANS arrêter flux de solvant= phase mobile)

2) Solvants

de qualité = super important (évite poussières), dégazage des solvants = permet élimination des gaz dissous, évite la formation des bulles

3) Les pompes

Les pompes mettent les solvants (phase mobile) sous pression !! Mesure pression méga important (détecte fuite, colmatage, anormalité, formation bulles)

4) La colonne / phase stationnaire

Les phases stationnaires peuvent être particulaires OU non particulaires (pores en surface continue = phase monolithique)

• Alternative à l'UPLC qui est avec très faible granulométrie donc pression très intense = risque de niquer la colonne alors conception de Coreshell = Fused-Core NON paticulaire
• Phase X Terra insertion de substituant en surface et dans le coeur de la silice
• Phase XBridge pareil

5) Détecteurs

• UV-visible (spectrophotométrique) molécule qui a un groupe chromophore C=C
• Spectrofluorométrique molécule fluorescente ou dérivation
• DEDL = détection par diffusion de la lumière par les particules
• CAD aérosol chargé

6) Les modes de séparation

Servent à isoler des analytes par exemple les pigments d'un échantillon d'une plante

• Chromatographie d'exclusion stérique :

conditions isocratiques, phase station. = particules de gel

C'est la taille des pores qui va déterminer le domaine de séparation et séparer les analytes par leurs grosseurs

• Chromatographie d'échange d'ions : phase stationnaire chargée (négativement ou positivement)

Attention pas se gourrer : phase stationnaire est chargée (c'est comme ca) donc si elle est chargée négativement °X(-) alors on fait une chromato échangeuse de cation

on a les échangeurs Forts = indépendant du pH

on a les échangeurs faibles = DEPENDANT du pH

• Chromatographie d'adsorption ou de partage

Phase stationnaire = gel silice sur lesquels on peut greffer des substituants (large gamme de polarité) Si(OH)4 silanol (polaire) => donc les analytes polaires seront retenus

Phase normale = phase stationnaire polaire (diols, amino) Les R substituants sur la silice sont polaires

Phase inverse = phase stationnaire non polaire (C18, phényles)

7) Les phases mobiles :

• pH méga important à optimiser = selon pka des analytes, joue sur le degré d'ionisation des échangeurs
• Nature des ions de la phase mobile super important (pour échangeur d'ions)